腦康膠囊定性定量分析
來源：中大網(wǎng)校發(fā)布時間：2012-12-28
摘要：目的對腦康膠囊中丹參、川芎、葛根進行薄層色譜定性鑒別，并測定腦康膠囊中葛根素的含量。方法采用薄層色譜法（TLC）對上述3味藥材進行鑒別，展開劑分別為苯醋酸乙酯（19：1）、正己烷醋酸乙酯（9：1）、氯仿甲醇水（78：35：10）的下層液；采用反相高效液相色譜法測定葛根素的含量，DiamonsilC18色譜柱（5μm，150mm×4.6mm），以甲醇0.015%磷酸溶液（23：77）為流動相，流速為1.2ml/min，柱溫35℃，檢測波長249nm，測定。結果HPLC測定的線性范圍為0.02～0.12μg，相關系數(shù)r=0.9999；膠囊中葛根素的平均回收率為98.53%，RSD=1.08%，n=6；精密度（RSD＜2%）良好。結論該法操作簡便、快速、準確，適用于腦康膠囊中主要藥材的定性鑒別和葛根素的含量測定。
關鍵詞：葛根素；腦康膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法
腦康膠囊系由葛根、川芎、丹參等藥材組成的中藥復方制劑，具有補益肝腎、填精補髓、活血通脈的功效。主要用于治療腦動脈硬化癥肝腎精虧兼瘀血阻絡證，癥見頭暈頭痛，神疲健忘，胸悶或痛，口干目澀，腰膝酸軟，虛煩少寐等。為了控制本品的質量，筆者采用TLC法對制劑中所含的川芎、丹參、葛根等3味藥材進行了薄層色譜鑒別實驗，并采用HPLC法測定本品中葛根素的含量。經(jīng)方法學研究表明，該方法具有簡便易行、結果可靠、靈敏度高、重現(xiàn)性好、專屬性強等特點，可作為腦康膠囊質量控制標準。
1儀器與試藥
美國Waters高效液相色譜儀（2690溶劑輸送系統(tǒng)，996二極管陣列檢測器，自動進樣器，Millenium32數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)）：葛根素、丹參酮ⅡA、川芎對照藥材（中國藥品生物制品檢定所提供）；腦康膠囊和各種陰性膠囊由成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥藥劑學教研室提供（批號為：040902，040906，040910）；硅膠G（薄層層析用，青島海洋化工廠）：甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。
2方法
2.1TLC鑒別實驗
2.1.1丹參的鑒別取本品內容物5g，加乙醚30ml，置水浴中加熱回流1h.濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺丹參的陰性樣品制成陰性對照品溶液，另取丹參酮ⅡA對照品，加乙醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗。吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯（19：1）為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與丹參酮ⅡA對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紅斑點，陰性對照品無此斑點。見圖1.
2.1.2川芎的鑒別取本品內容物5g，加乙醚20ml，置水浴上加熱回流1h，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺川芎的陰性樣品制成陰性對照品溶液。另取川芎對照藥材1g同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品無此斑點。見圖2.
2.1.3葛根的鑒別取樣品5g，置索氏提取器中，加乙醚30ml置50℃水浴上回流提取2h，棄去乙醚液；殘渣加30ml甲醇回流提取4h，提取液蒸干，殘渣加水20ml使溶解并轉移至分液漏斗中，加水飽和的正丁醇液萃取兩次，20ml/次，合并正丁醇液，濃縮至干，殘渣加甲醇2ml溶解，加于已處理好的聚酰胺柱（內徑1.5cm，填充高度約15cm）上，用水80ml洗脫，收集水洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液。同法缺葛根的陰性樣品制成陰性對照品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水（78：35：10）的下層液（15℃以下放置過夜）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的淡藍色熒光斑點，陰性無干擾。
2.2含量測定
2.2.1色譜條件色譜柱DiamonsilC18（5μm，150mm×4.6mm）；流動相甲醇0.015%磷酸溶液（23：77）；流速1.2ml/min；柱溫35℃；檢測波長為249nm；靈敏度0.001AUFS.在選定條件下，葛根素和樣品中其它分色譜峰可基線分離，葛根素與其相鄰色譜峰的分離度大于1.50；按葛根素峰計算，理論板數(shù)（N）為3000以上，拖尾因子（T）為1.03.
2.2.2測定方法供試品溶液的制備：取本品內容物適量，研勻，取0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，置水浴上回流45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。陰性樣品溶液的制備：取腦康陰性膠囊（缺葛根）內容物適量，研勻，取0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，置水浴上回流45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇制成每毫升含10mg的溶液。測定：分別精密吸取對照品、供試品和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，根據(jù)葛根素對照品的峰面積，計算出樣品的含量。
2.2.3測定結果標準曲線的制備：精密量取葛根素對照品溶液（10μg/ml）2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸，得標準曲線方程為：C=2.5914×107A＋1.9359×103，r=0.9999.結果表明，葛根素在0.02～0.12μg范圍內呈良好線性關系。精密度實驗：精密吸取上述對照品溶液5μl，重復進樣5次，葛根素峰面積的相對標準差（RSD）＜2%，結果表明，精密度良好。穩(wěn)定性實驗：取樣品供試液分別于0，2，4，8，12h進樣10μl，測得樣品中葛根素峰面積值的相對標準偏差＜2%，結果表明，樣品供試液在12h內穩(wěn)定性良好。重復性實驗：按擬定的含量測定方法，取同一批樣品五份，分別制備樣品供試液，測得峰面積值及含量，其相對標準偏差＜2%，結果表明，重復性好。回收率實驗：取6份已知含量的樣品約0.2g，分別加入葛根素對照品溶液（10mg/ml）75，150，225μl照含量測定項下方法測定，結果，3種水平6次實驗的加樣回收率測定結果均在95%～105%之間，其平均值為98.53%，RSD為1.08%.
