臨床助理醫(yī)師醫(yī)學(xué)微生物學(xué)資料:病毒感染的檢查方法
來源：網(wǎng)絡(luò)發(fā)布時(shí)間：2014-07-15
一、標(biāo)本的采集與送檢(principle of collection specimen)
1、采集急性期標(biāo)本
2 、污染標(biāo)本應(yīng)用抗生素抑制標(biāo)本中細(xì)菌或真菌的生長
3 、低溫保存，快速送檢
4、 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢查抗體(雙分血清)
二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定
(一)病毒的分離培養(yǎng)
• 動(dòng)物接種 選擇易感動(dòng)物及接種部位，觀察發(fā)病情況
• 雞胚培養(yǎng) 不同病毒選擇不同接種部位(絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊)，分離流感病毒最常用。
• 細(xì)胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法
(1)原代細(xì)胞—來源于動(dòng)物、雞胚、人胚組織細(xì)胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。
(2)二倍體細(xì)胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細(xì)胞。
(3)傳代細(xì)胞—能在體外無限傳代的細(xì)胞多由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來。
病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)：
• 細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)：即某些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起的特有的細(xì)胞病變(細(xì)胞變圓、聚集、壞死、脫落等)
• 紅細(xì)胞吸附
• 干擾現(xiàn)象
• 細(xì)胞代謝改變(pH)
(二)病毒的鑒定
核酸類型、理化性狀、形態(tài)、血清學(xué)鑒定、基因測序和生物對比。
(三)病毒的數(shù)量與感染性測定
1.50%組織細(xì)胞感染量
2.紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)
3.空斑形成試驗(yàn)
三、病毒的血清學(xué)診斷
用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾病(中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝抑制實(shí)驗(yàn)、凝膠免疫擴(kuò)散等)。
四、病毒的快速診斷
(一) 形態(tài)學(xué)
電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒
光鏡—— 大病毒 和包涵體
(二)檢測病毒蛋白抗原
用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原(簡便、敏感、特異)
常用方法：免疫熒光技術(shù)(IF)
固相放射免疫測定(SPRIT)
酶免疫技術(shù)(EIA)等。
(三) 檢測病毒特異性IgM抗體
檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復(fù)制。
(四)檢測病毒的核酸
1 核酸雜交
– 斑點(diǎn)雜交(dot hybridization)
– 原位雜交(in site hybridization)
– DNA印跡雜交(Southern blot)
– RNA印跡雜交 (northern blot)
2 核酸擴(kuò)增
– 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction，PCR DNA)
– 連接酶鏈反應(yīng)(ligase chain reaction，LCR)
– 反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcrptase PCR，RT—PCR (RNA)
3 基因芯片技術(shù)(gene chip)
